来自重庆第二师范学院生物与化学工程学院、桂林医学院公共卫生学院、韩国釜山大学食品科学与营养学系的赵欣、易若琨、冯霞等以2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(AAPH)处理猪肾近曲小管上皮LLC-PK1细胞构建细胞氧化损伤模型，探究芝麻酿造酱油对AAPH所致细胞氧化应激损伤的保护作用机制，为芝麻酿造酱油预防氧化应激引起的肾脏疾病提供一定的参考依据。
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SSE对受损LLC-PK1细胞存活率的影响
经质量浓度分别为10、50、100 μg/mL的SSE处理后，LLC-PK1细胞的存活率均超过90%。该结果提示SSE对LLC-PK1细胞无明显的细胞毒性作用。 因此在后续的研究中，10、50、100 μg/mL为对细胞生存无影响的安全浓度。此外，相比正常组细胞而言，直接暴露于AAPH（1 mmol/L）4 h后可造成LLC-PK1细胞生存率显着下降（P<0.05）。而经不同质量浓度SSE处理24 h后，受损细胞的存活率较未处理细胞有所上升，且保护效果随SSE的质量浓度增加而增强，特别是在较高质量浓度处理时（50、100 μg/mL）保护效果显着（P<0.05）。
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SSE对受损LLC-PK1细胞内MDA含量和ROS相对含量的影响
经1 mmol/L AAPH处理4 h后，LLC-PK1 细胞内MDA的含量较正常细胞内MDA含量显着上升（P<0.05）。但在给予不同质量浓度SSE（10、50、100 μg/mL）后，细胞内MDA含量发生显着下降（P<0.05），在经100 μg/mL的SSE处理时，细胞内MDA含量最低。同时，AAPH处理还能造成LLC-PK1细胞内ROS水平显着升高（P<0.05）。而经过不同质量浓度SSE（10、50、100 μg/mL）处理24 h后，受损细胞内的ROS水平呈逐渐降低趋势。且SSE在100 μg/mL时，具有较强的ROS抑制能力。
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SSE对受损LLC-PK1细胞内CAT、SOD和GSH-Px活力的影响
AAPH造成LLC-PK1细胞内CAT、SOD和GSH-Px活力的降低。相反，经不同质量浓度SSE （10、50、100 μg/mL）处理24 h后，受损细胞内的抗氧化酶活力逐渐升高，与未经SSE处理的损伤模型组相比存在显着差异（P<0.05）。
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SSE对受损LLC-PK1细胞内γ-GCS活力和GSH含量的影响
AAPH处理不仅能够明显抑制细胞内γ-GCS活力，同时还能造成细胞内GSH含量显着降低（P<0.05）。而经SSE（10、50、100 μg/mL）处理24 h后，受损的LLC-PK1细胞内γ-GCS活力逐渐增高。同时，细胞内GSH含量也得以恢复并呈增高趋势。且与损伤模型组相比，较高剂量的SSE(50、100 μg/mL)对受损的 LLC-PK1细胞中γ-GCS活力和GSH含量的干预作用明显（P<0.05）。
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SSE对受损LLC-PK1细胞内SOD、GSH-Px和CAT基因表达水平的影响
通过实时荧光定量PCR分析发现，1mmol/L的AAPH造成LLC-PK1细胞内SOD、 GSH-Px和CAT这3种主要内源性抗氧化物酶mRNA表达水平显着降低（P<0.05）。而由SSE处理后，受损LLC-PK1细胞中的内源性抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT 基因的表达水平逐步增强。与损伤模型组相比，较高剂量（50、100 μg/mL）SSE对受损的LLC-PK1细胞中SOD、 GSH-Px和CAT基因的表达水平干预作用明显（P<0.05）。
结 论
本研究发现，LLC-PK1细胞暴露于AAPH（1 mmol/L）后，细胞存活率明显下降。给予不同质量浓度的SSE处理24 h后，LLC-PK1细胞存活率较未经SSE处理的受损细胞明显增高（P<0.05）。在受损的LLC-PK1细胞中，SSE处理可以降低受损细胞内总ROS水平并降低MDA含量。经不同质量浓度SSE预先保护后，受损细胞内的主要抗氧化酶（CAT、SOD、GSH-Px）活力和γ-GCS含量升高，非酶抗氧化物质GSH含量也得到上升。芝麻酱油还能上调受损的LLC-PK1细胞中主要抗氧化酶mRNA的转录水平。通过增强细胞内CAT和GSH-Px的转录水平有助于提高细胞内总铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)的活性，可减缓细胞的氧化应激损伤。
