材料和试剂
1.细胞：贴壁细胞株
2.试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3.仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
初代组织块培养法
1.剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2.摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
3.轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。
4.培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
传代培养法
操作步骤
1.吸除培养瓶内旧培养液。
2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
3.置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
4.吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。
5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6.计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
细胞株无菌操作注意事项
1.操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2.点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3.操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4.不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5.瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。
6.吸溶液的吸管等不能混用。
