来自浙江工商大学食品与生物工程学院的王远、郑雯和蔡珺珺等人采用微波辅助提取、聚酰胺层析柱纯化辣木叶黄酮,借助超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)联用技术对纯化后的辣木叶黄酮的结构进行定性分析和鉴定,并且研究了其对胰脂肪酶的抑制作用,为开发预防和治疗肥胖的药物提供理论基础,也为相关保健食品的研究与开发提供了新的依据。
1.辣木叶黄酮的提取与纯化结果
用微波辅助提取辣木叶黄酮,提取液经旋转蒸发、冷冻干燥得到纯化前的辣木叶黄酮样品粉末,经计算辣木叶总黄酮提取率为(5.53±0.11)%,其纯度为(133.78±7.87)mg/g;聚酰胺层析柱纯化后,收集洗脱液旋转蒸发、冷冻干燥,得到纯化后的辣木叶黄酮样品粉末,其纯度为(661.10±9.20)mg/g,纯化后纯度提高了5 倍。
2.辣木叶黄酮的结构
结果共鉴定出11 个黄酮类化合物。11 个黄酮类化合物均为黄酮苷,其中5个为槲皮素苷,4 个为山柰酚苷,1个为芹黄素苷,1 个为异鼠李素苷。
3.辣木叶黄酮对胰脂肪酶的抑制作用
对实验数据进行拟合得到纯化的辣木叶黄酮对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC50)为0.94 mg/mL,对照组奥利司他的IC50为0.17mg/mL。质量浓度为0.10~1.5 mg/mL时,纯化的辣木叶黄酮对胰脂肪酶的抑制率从20.12%增加到58.77%,未纯化的样品抑制率为0.78%~27.62%,且在各个质量浓度下,纯化样品的抑制率均高于未纯化的样品,差异显着(P<0.05),表明辣木叶黄酮对胰脂肪酶具有较好的抑制作用,且纯化富集之后抑制效果提高。
4.辣木叶黄酮对胰脂肪酶的抑制作用类型
当样品质量浓度为0~1mg/L时,直线在X轴的截距不变,斜率变大,米氏常数Km不变,vm值变小,表明纯化的辣木叶黄酮对胰脂肪酶的抑制作用为典型的非竞争性抑制。
结 论
纯化后的辣木叶黄酮对胰脂肪酶有较好的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为0.94 mg/mL,通过Lineweaver-Burk法测定出其抑制作用类型为非竞争性抑制。