来自中国农业大学食品科学与营养工程学院的陈静茹和中国农业大学动物科技学院的夏海剑、张泽宾等取多趾北京油鸡（实验组）和市售华都艾拔益加肉鸡（对照组）的鸡胸肉为样品，提取生肉、热处理（煮制、烤制、炸制）熟肉的基因组DNA为模板，鉴定了食品中多趾北京油鸡肉与艾拔益加肉鸡的区别，为北京油鸡产业的发展提供一定理论依据。
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PCR测序法对多趾北京油鸡生肉和熟肉样品的鉴定
北京油鸡野生型纯合体的基因型为CC，性状为4 趾；突变型杂合体的基因型为AC，性状为多趾；突变型纯合体的基因型为AA，性状为多趾。根据GenBank设计引物，引物序列如下：U：5’-GCGATTTCCTCTCACCCACA-3’；D：5’-AGCTGAGCAACATGACAGCA-3’。提取样品的基因组DNA进行PCR扩增之后的条带大小为400 bp左右，样品在经过不同温度的煮制、烤制以及炸制后，PCR扩增结果一致，琼脂糖凝胶电泳检测之后条带大小均为389 bp，说明不同的热处理（煮制、烤制、炸制）对实验组和对照组样品DNA的提取效果影响不大，不同温度的煮制条件（75～95 ℃）对PCR的测序结果基本没有影响。测序之后在该碱基位点处，不同基因型和左右碱基的峰值的相对高度各不相同，CC型峰值较高，AC型为两个杂峰混在一起，峰值较矮，因为此次实验所用多趾北京油鸡均为杂合子，所以测序之后并没有突变型纯合体AA型的峰值结果。表明通过测序的方法可以有效鉴别出不同条件下（生鸡肉和煮制、烤制、炸制熟鸡肉）的多趾北京油鸡肉和市售华都艾拔益加肉鸡肉。PCR产物经测序验证，其检测限达到0.0625%。
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PCR测序法和限制性酶切片段多态性（RFLP）分析法对生肉和熟肉样品的鉴定
在突变位点的碱基为C时，BsrDⅠ能切断DNA，当该位点碱基为A时，BsrDⅠ不能切断DNA。酶切后将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。基因型为CC的个体趾性状表现为4 趾，检测结果为普通鸡肉；基因型为AA和AC的个体趾性状表现为多趾，检测结果为多趾北京油鸡肉。
多趾京油鸡基因组DNA经过BsrDⅠ酶切后，其400 bp左右的扩增产物，被酶切为2 个片段，片段长度分别为200 多个碱基对和100 多个碱基对。根据电泳结果可知，本次实验所取的多趾北京油鸡均为突变型杂合体，其基因型为AC，酶切电泳结果为3 条条带；市售华都艾拔益加肉鸡基因型为野生型纯合体CC，酶切电泳结果为2 条条带，片段长度分别为200 多个碱基对和100 多个碱基对。通过实验组和对照组的酶切结果可以明显鉴别出多趾北京油鸡，且在不同热处理（煮制、烤制、炸制）下，酶切之后的电泳结果一致，说明PCR-RFLP分析法同PCR测序法一样，在鉴别检测过程中不受煮制、烤制或炸制处理的影响。
结 论
本实验通过应用PCR测序法和PCR-RFLP法，提取不同温度煮制、烤制以及炸制处理条件下多趾北京油鸡和市售华都艾拔益加肉鸡的DNA进行检测。其中PCR测序法通过使用软件DNAstar将测序结果进行对比，从而直接分析突变位点的基因完成鉴别；PCR-PFLP法通过实验组和对照组的酶切结果分析条带数间接确定突变位点的碱基，从而完成鉴别。这2 种方法在鉴别检测过程中不受煮制、烤制或炸制处理的影响，均可以有效完成对多趾北京油鸡肉的鉴别，为市售多趾北京油鸡肉的检测提供了理论依据。本实验只能鉴别出多趾北京油鸡，无法鉴别全部的北京油鸡，只选择了华都艾拔益加肉鸡作为对照组，具有局限性。
