比较不同动物血液制备的巧克力平板在不同的储存温度下对流感嗜血杆菌的影响。
02 实验方法
用羊血和兔血分别制备成巧克力平板，同时以国内厂家Ⅰ和厂家Ⅱ的平板作对照，分别放置在冷库( 4 ℃ ) 、常温( 25 ℃ ) 、高温( 42 ℃ ) 3 种不同的储存条件下，在 3 个月的保质期内不同的时间点，分别接种流感嗜血杆菌，比较各配方上其菌落大小和生长率。
2． 1 巧克力板的制备
按照使用说明配制哥伦比亚琼脂并灭菌，放置至 78 ℃的水浴锅中，当温度稳定后每哥伦比亚琼脂分别加入脱纤维羊血( a 北京、b 郑州) 、脱纤维兔血( 郑州) ，恒温 10 min 后继续冷却，冷却至 45 ℃ ～ 50 ℃加入万古霉素，充分摇匀后倾注平板备用。
2． 2 储 存 试 验
将巧克力板分别置于冷库( 4 ℃ ) 、常温( 25 ℃ ) 、高温( 42 ℃ ) 3 种条件下存放，高温放置 1 周后改为冷库储存。在 1 周、1 个月、2 个月、3 个月 4 个时间点，分别比较流感嗜血杆菌在巧克力平板生长的菌落数和大小。
2． 3 菌悬液制备
将流感嗜血杆菌 ATCC10211接种于巧克力平板中，( 35 ± 2) ℃ 5% CO2 培养 24 h后，挑取菌落在无菌生理盐水中悬浮，制备含活菌数为 3 × 102cfu /ml ～ 3 × 103 cfu /ml 的菌悬液，备用。
2． 4 试验菌悬液的接种
各取上述菌悬液 0． 1 ml分别螺旋接种至运输试验前后的各配方巧克力平板上，每个配方做 3 个平行，于( 35 ± 2) ℃ 5% CO2 培养 18 h ～ 24 h 后进行菌落计数。
2． 5 比对试验
在流感嗜血杆菌 ATCC10211 标准株基础上，增加 5 株流感嗜血杆菌的分离株。将前2 次实验比较好的改进配方制备的巧克力板与国内厂家的巧克力平板比较实验前后生物学效果。
统计学处理 采用 SPSS 19． 0 软件，以 P ＜ 0． 05为差异有统计学意义
03 实验结果
放置在冷库的羊血制备的巧克力平板上流感嗜血杆菌菌株生长良好；
放置在常温下的平板 1 个月后菌落变小，2 个月后菌落不生长；
放置在高温下的平板 1 周后流感嗜血杆菌不生长；
而兔血制备的巧克力平板在不同储存条件下对流感嗜血杆菌生长差异无统计学意义( P ＞ 0． 05) 。
厂家Ⅰ在 4 ℃ 和 25 ℃ 储存 1 个月后菌落明显变小，42 ℃1 周后无生长。
厂家Ⅱ在 4 ℃、25 ℃、42 ℃ 储存后菌落大小差异无统计学意义( P ＞ 0． 05) ，但生长率明显降低。
结论：兔血制备的巧克力平板质量稳定，优于羊血所制备的平板和国内同类产品。
