来自上海海洋大学食品学院的李姝和上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所的邵毅、周昌艳等人以市售鸡肉和内脏产品为对象,研究了非致病磺胺耐药菌的污染水平、耐药特性、耐药基因携带情况及潜在的迁移风险,以期为肉鸡养殖中的抗生素管理、初加工过程的微生物控制提供理论依据。
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磺胺耐药菌计数和多耐表型
13 个样品的总可培养菌数量差异较大,但均分离到了耐药菌Sul/Trir,菌落数为2.0×102~1.0×107 CFU/g。69.23%的样品中Sul/Trir菌的数量高于104 CFU/g,有3 个鸡腿样品和1 个整鸡样品的Sul/Trir菌数量甚至达到了106 CFU/g的水平。9 个鸡肉样品中,Sul/Trir菌占总可培养菌的比例为1.42%~70.42%,4 个内脏样品的这一比例为13.74%~82.00%。因此,市售鸡肉及内脏样品中普遍存在Sul/Trir菌。
分离到的256株Sul/Trir菌中,多重耐药现象普遍:91.58%的菌至少对2 种抗生素不敏感,近1/4的菌对全部6 种抗生素均不敏感。内脏样品中分离的Sul/Trir菌的多重耐药性较鸡肉样品更为普遍,77.17%的菌至少对5 种抗生素不敏感。除Sul/Tri外,256 株菌对Tet、Dox、Erm、Ctx和Cip的耐药率分别为87.21%、68.69%、68.69%、64.31%和48.82%。
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Sul/Trir菌的MIC、耐药基因和菌种鉴定
sul1、sul2、tetA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetL、tetM和intI的检出率分别为11.33%、32.81%、6.64%、12.89%、2.73%、6.25%、9.38%、18.75%、39.84%和28.52%。同时含有至少3 个耐药基因的菌有15 株,包括5 株埃希氏菌(其中4 株为大肠杆菌)、4 株土地杆菌、2 株葡萄球菌、2 株肠球菌、1 株鞘氨醇杆菌和1 株不动杆菌。
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耐药基因的定位
用Southern杂交研究耐药基因sul1和sul2的定位,结果表明,Rci1号样品Sul/Trir菌的质粒上可能存在sul2基因。提取Rci1号样品Sul/Trir菌的质粒并转化至大肠杆菌DH5-α中,Sul/Tri对阳性菌株的MIC大于256?μg/mL,而对原始DH5-α的MIC小于4?μg/mL。因此认为Rci1号样品的Sul/Trir菌中,质粒上含有sul2基因,存在sul2基因随质粒在不同菌种间迁移扩散的可能性。所有菌株的质粒上未发现sul1基因。
结 论
所有样品均分离到了Sul/Trir菌,菌落数为2.0×102~1.0×107 CFU/g,占总可培养菌的1.42%~82.00%。297 株Sul/Trir菌的多重耐药现象普遍,耐药基因sul1、sul2、tetA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetL、tetM和intI的检出率分别为11.33%、32.81%、6.64%、12.89%、2.73%、6.25%、9.38%、18.75%、39.84%和28.52%。耐药基因的寄主菌包括Escherichia sp.、Pedobacter sp.、Staphylococcus sp.、Enterococcus sp.、Sphingobacterium sp.和Acinetobacter sp.等,大多数的磺胺最小抑菌浓度大于512?μg/mL,其中一株葡萄球菌的质粒上有sul2基因。综上,耐药菌和耐药基因可能通过市售鸡肉及内脏产品进行迁移。