一、琼脂扩散试验分类
1、单向琼脂扩散试验：是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量抗体与琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。单向琼脂扩散试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。
2、双向琼脂扩散试验：是将半固体琼脂倾注于平皿内或玻片上，待其凝固后，在琼脂板上打孔，将抗原、抗体分别注入小孔内，使两者相互扩散。如果抗原、抗体相互对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线，不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同，可在琼脂中形成不同的沉淀线。本法主要是用于检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺点是需要时间过长，灵敏度不高。
二、琼脂免疫扩散试验方法
材料与试剂
1、琼脂粉
2、平皿
3、打孔器
4、生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。
操作方法
1、称取一定量的琼脂粉，按1%左右（0.8%～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。
2、将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。
3、根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径）按模板打孔。也可直接用组合打孔器打孔。现在一般多打成梅花形孔图。
4、挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。
5、在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。
6、以毛细滴管吸取样品加入孔内，注意不要产生气泡，以加满为度。加少了，影响反应程度，加多了，易溢出，也影响反应结果。
7、加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，37℃自由扩散24h～48h。
