液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触最多的是流动相,也就是流动相,是造成液相色谱各种问题的最主要源头。做好液相色谱仪的正确操作,能极大的降低故障率,减少维修和停机成本。下面就来说一说在液相色谱仪使用中的注意事项。
一、泵是液相色谱仪的心脏。处于良好工作状态的泵,基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。泵的使用要注意:
1.选择优质的溶剂和试剂,在进入仪器前用 0.45um 膜过滤,并进行脱气处理。
2.泵开始使用时,一定要用合适的流动相彻底清洗干净。
3.定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈,经常清洗进液处的微孔滤头。
4.改变流动相时,应注意沉淀的产生,以防止泵堵塞。
二、液相色谱法对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。所以说色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,要注意下列问题,以维护色谱柱。
1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况。因此在安装时要轻拿轻放。
2.色谱柱PH使用范围是2.0-9.0。当使用PH值范围边界时,分析结束立即用与所使用流动相互溶的溶剂彻底清洗置换流动相。
3.每次分析结束后,都要对色谱柱进行冲洗。每次工作完后,最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。
4.若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。
三、检测器是液相色谱的大脑,起着至关重要的作用。如何更好地发现和排除检测器故障是液相色谱使用的必备技能。
1、检测器是液相色谱仪器的数据收集部分,由很多的电子和光学元件组成。禁止拆卸更动仪器内部元件防止损坏或影响准确度。
2、仪器内部的流通池是流动相流过的元件,样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池,导致无法检测或检测结果不准,所以在使用了一段时间以后要先用水冲洗流通池和管路再换有机溶剂冲洗。
3、当仪器检测数据出现明显波动,基线噪音变大时要冲洗仪器管路,冲洗后如果还是没有改善就应该检测氘灯能量,如果能量不足就因更换新的氘灯。
4、仪器在每次使用完了以后都要用水和一定浓度的有机溶剂冲洗管路,保证下次使用时管路和系统的清洁。