一、CN平板的菌落形态
下图是实验过程中见到的比较不干净的桶装水,当然绝大部分的水在CN平板上无菌生长,这些不干净的桶装水也是我做铜绿后续生化的小白鼠。
二、生化反应
1、若CN板上是蓝绿色(如下图)
按照GB8538-2008标准可以直接得出绿色是铜绿假单胞菌,不过新的GB85538-2016增加了绿脓菌素实验(步骤如下图)。
1.1绿脓菌素测定培养基中加入三氯甲烷后的颜色(如下图)
1.2用吸管将三氯甲烷移到另一试管内加入盐酸,振荡,静置(如下图)
1.3蓝色菌落呈粉红色,绿色菌落呈淡粉色,有绿脓菌素存在。
2、若CN板上有荧光(如下图)
按照GB85538-2016标准,产荧光(非蓝绿)要进行产氨实验。
2.1将产荧光的菌落的纯培养物接种到乙酰胺肉汤中36℃培养24h,加入钠氏试剂(如下图)。
3、若CN板上是红褐色
按照GB85538-2016标准,红褐色菌落要进行产氨试验、氧化酶试验。金氏B产荧光试验。
鉴于本人经验有限,接触样品不多,买的标准菌株也是绿色形态(前面那株蓝色菌落也是样品中发现的,甚是宝贵)。所以,至今未见过红褐色菌落,若有同行有检出或者见过,还望交流,多加学习。
3.1标准菌株形态(如下图)
3.2产氨实验(同上,略)
3.3氧化酶试验(如下图)
3.4金氏B产荧光试验(如下图)
4、其他
其他非前面三种,则判断不是铜绿假单胞菌。
三、PH对铜绿的影响
曾经请教过一位老师,铜绿在酸性环境下会是红褐色,所以做了不同PH下(拿试纸调试的PH,可能不太严谨)铜绿在CN平板上的形态。不过还是没有看到红褐色。
后记:作为一名微生物检测者,我非常喜欢我的这份工作,平时上班比较忙,这篇论文是花了三个晚上整理出来的。欢迎大家讨论指正,我们共同交流,共同学习。