微生物限度中薄膜过滤法相较于传统的直接接种法,对液体样品中微生物检测占有很大的优势。菌落富集,菌落的恢复生长率及菌落形态分布等。根据不同的样品选用不同材质的滤膜,以达到最佳的富集效果。
滤膜:
常用的滤膜材质大都为混合纤维素酯,由于醋酸纤维素和硝酸纤维素的混合物不具有生物活性,主要用于水溶液的过滤。根据药典规定滤膜孔径一般不大于0.45um,直径一般为50mm。市面上分为无菌包装即用型的滤膜和非无菌包装的滤膜。推荐使用无菌包装的滤膜,操作简单,减少二次污染的风险。
培养基:
药典规定制药用水微生物检测用培养基为R2A。
制药用水采用的R2A培养基原理如下:
R2A培养基可以修复被氯气损伤的细菌,支持耐受氯气的微生物的生长。
2A培养基中的酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖、为可发酵糖类;可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质。
R2A培养基中的丙酮酸钠可增强细菌的复苏。
R2A培养基中的磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂,无水硫酸镁提供二价阳离子,琼脂为凝固剂。
过滤设备
过滤设备的选择要点:
操作简便,过滤速度快
易于清洁,方便消毒
避免死角,防止生物膜产生
制药企业选购需关注IQ和OQ验证
过滤杯的选择:
培养结束后需立即计数,典型的菌落数为10-100个为最佳,每张滤膜的菌落数不得多于200个,避免造成堆叠和蔓延生长。
常见计数异常分析: