操作要求戴口罩，手套要求新的，枪头，EP管全部无酶。
操作步骤
1)液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软（仅可软一次），乘它是软的，把它压平，继续研磨。若液氮挥发完要迅速补充液氮，一直让样品保持冻着的状态。磨到差不多的时候，聚组织于一堆，加1000mlTrizol在它们上面。锡箔纸盖住研钵室温静置10Min左右，至混合液溶解。
注意：最好不要等组织变软，变软后RNA容易降解。但是软一次，实验证明没
事的，压平后很容易磨碎。其实冻着状态更容易磨碎。磨的时候，小心组织飞掉。飞掉的话，我们是捡回来的。研磨这步很重要，研磨既要充分又不能让RNA降解，磨到粉末状。按50-100mg 组织/ml Trizol 加入Trizol。Trizol裂解细胞，促使核蛋白复合体解离，而且有效抑制RNase活性。
2) 吸入混合液于无酶的1.5mlEp管中，再加200ul（一般）氯仿，用手剧烈震荡30s，室温放置15Min。
注意：加氯仿使RNA进入离心后的上层液体中
3）4℃ 12000g离心15Min
4）取上清于另一个EP管中，再加200ul氯仿，吹打混匀，同样条件再离心一次。
5）吸上清于另一个EP管中
注意：不可全吸，防止吸入下面的杂质。
6）加入等体积的异丙醇（一般500ul），室温放置5—10Min。 注意：此步沉淀RNA. 也可以放入-20度，先吃饭。
7）4℃ 12000g离心10Min 弃上清 8）加入1ml 75%乙醇，温和震荡得沉淀 9）4℃ 8000g 离心5Min 尽量弃上清
10）室温干燥 5---10Min（倒扣于滤纸上，EP管盖子打开）
11）10ul的DEPC水溶解，吹打混匀。
12）19ulDEPC水于另一支EP管中，从11）中取1ul于其中吹打混匀测OD值。11）中的RNA-80度保存。
12）中的测完后弃掉
注意事项
1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
3、在收集到生物材料之后，最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将材料急速冷冻后，储存于-80℃冰箱。在制备RNA时，将储存于冰箱的材料取出，立即加入液氮研磨，绝不可以先行解冻。
