技术原理
试剂盒基于环介导恒温扩增技术(LAMP)荧光法检测,利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构,引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应,实现在恒温条件下(60-65℃)进行连续快速扩增。反应体系中加入了显色指示剂,阴阳性结果显色差异显着,扩增结束后可以通过观察荧光显色剂的颜色变化判读结果,无需开盖避免了扩增产物交叉感染性的可能性。LAMP是一种新型的恒温核酸扩增技术,该技术无需常规PCR中变性、退火、延伸等步骤不同温度设计要求,只需提供一个适宜的恒定温度即可,因此,与常规PCR相比,LAMP技术更适合现场高通量快速检测,具有简单、快速、特异性强的特点。
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应用范围
恒温扩增荧光法检测技术可运用于快速检测食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核增生李斯特菌、副溶血弧菌、大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、小肠结肠耶尔森氏菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、产气荚膜梭菌。
应用于食品快速检测有两种方式:
1、快速筛查。对食品样品快速增菌后,直接采用基因检测试剂盒来快速筛查有没可疑致病菌(对大多数致病菌在13小时内即可完成筛查);
2、快速鉴定。对食品样品进行增菌,平板分离,使用基因检测试剂盒对可疑菌落进行快速准确的鉴定(1小时内完成鉴定)。
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快速筛查食品中致病菌操作流程
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快速鉴定可疑菌落操作流程
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恒温扩增试剂盒特点
特点
操作简单:通过几部加样后,60-65℃范围内恒温条件下即可完成扩增。
使用便捷:一管式冻干,免去繁琐的配制步奏。
仪器简单
扩增条件简单,能提供恒温装置即可。
特异性高:
比传统PCR灵敏度高10-100倍,可检测5-20个拷贝。
快速判读
使用合适的增菌液收集到足够菌体后,40-60分钟内可完成检测,肉眼观察颜色变化即可判读结果,全部检验流程仅需约13h。