革兰氏染色（Gram Staining）是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是丹麦一位医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。
未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察到阳性显紫色，阴性显红色。染色后细菌与背景形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。
革兰氏染色的原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了结晶紫与碘的复合物，该复合物不容于水。
革兰氏阳性（Gram-Positive）菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。
而革兰氏阴性（Gram-Negative）菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色的步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红精（稀）染1分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
