HPLC进样方式可分为：隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
1.隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内，可把样品直接送到柱头填充床的中心，死体积几乎等于零，可以获得最佳的柱效，且价格便宜，操作方便。但不能在高压下使用(如10MPA以上)；此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应，使进样重复性只能达到1～2%；加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到，常规分析使用受到限制。
2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”，另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中，效果较好。
3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀，其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积在存在，柱效率低于隔膜进样(约下降5～10%左右)，但耐高压(35～40MPA)，进样量准确，重复性好(0.5%)，操作方便。
六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。
①用部分装液法进样时，进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%)，并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度，而且易产生由进样引起的峰展宽。
②用完全装液法进样时，进样量应不小于定量环体积的 5～10倍（最少3倍），这样才能完全置换定量环内和流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性。
六通阀使用和维护注意事项
①样品溶液进样前必须用0.45UM滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。
②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。
③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
4.自动进样。用于大量样品的常规分析。
