1. 适用范围
适用于生产车间的空气落菌数的检测，车间内与产品接触的设备表面、内包装材料、人手表面的微生物采样及检测。
2．设备及材料
培养箱：36±1℃；冰箱0-4℃；恒温水浴46±1℃；电炉：可调试；平皿：皿底直径为9cm；移液管：10ml，标有0.1 ml单位的刻度；移液管：5ml，标有0.1 ml单位的刻度；试管;试管架；灭菌棉签；计时器；吸管:容量为10ml;灭菌规格板内径为(10cm×10cm);酒精灯;打火机;酒精棉球；玻璃蜡笔；托盘。
营养琼脂培养基；乳糖胆盐培养基；伊红美兰琼脂培养基；生理盐水,定量分装于玻璃瓶和试管内，灭菌。
3．操作步骤
3.1生产车间空气中细菌菌落采样及培养
3.1.1室内空气中室温面积不超过30m2，在对角线上设前、后两点，两点位置距墙1m，室内面积超过30m2，设里、中、外三个点，周围三点距墙1m.。采样时将含营养琼脂培养基的平皿(直径9cm)置采样点(约桌面高度)，打开平皿盖，使平皿在空气中暴露30min以上。
3.1.2在采样前将准备好的营养琼脂培养基36±1℃培养24h，取出检验有无污染，将污染培养基剔除。将已采集的培养基送实验室，置36±1℃培养48 h，观察结果，计数平皿上细菌菌落数。
3.2接触面的采样与检测
3.2.1设备表面、内包装材料表面：将经灭菌的内径为10cm×10 cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含50 ml灭菌生理盐水的采样瓶。
3.2.2工人手：被检人五指并拢,用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含50 ml灭菌生理盐水的采样瓶。
3.2.3细菌菌落总数检测：以无菌操作,将已采集的每支样管充分混匀后取1ml样液,放入灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基，每个样品平行接种两块平皿，置36±1℃培养48h,计数平皿上细菌菌落数。
式中
y2 ____ 工作台表面细菌菌落总数,cfu/ cm2
A ____ 平皿上平均细菌菌落数
s2 ____ 采样面积 cm2
y3 _____ 工人手表面细菌菌落总数 cfu/只手
3.2.4大肠菌群数检测
3.2.4.1将采集的每个样瓶充分混匀后取10ml样液，放入双料乳糖胆盐发酵培养管中（如是单料管则取1ML样液），平行做三个样；然后吸取1ml样液放入装有9ml灭菌生理盐水中，稀释均匀后，取1ml稀释液放入单料乳糖胆盐发酵培养管中，平行做三个样；再吸取经稀释的1ml样液放入装有9ml灭菌生理盐水中，稀释均匀后，取1ml稀释液放入单料乳糖胆盐发酵培养管中，平行做三个样，共9根管。将待培养的乳糖胆盐发酵管放入36±1℃培养24h。
3.2.4.2如不产酸，不产气即为大肠菌群阴性。
3.2.4.3若某管产酸产气，则应从该管中接种至伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性实验。
3.2.4.4在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，置36±1℃培养箱培养24h。
3.2.4.5凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。
4. 生产环境卫生指标
4.1 灌装间、清洁容器储存间和更衣室空气中细菌菌落总数应≤6 cfu/皿（化妆品生产企业卫生规范≤1000 cfu/立方米）。
4.2 灌装间工作台表面细菌菌落总数应≤20 cfu/ cm2。
4.3 工人手表面细菌菌落总数应≤300 cfu/只手，并不得检出致病菌。
4.4 大肠菌群：不得检出。
附表：药品生产质量管理规范附录
洁净室(区)空气洁净度级别表
