西华师范大学生命科学学院的钱叶、丁祥、曾益春等人通过检测在松乳菇多糖(LDG-A)作用下T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖效应、处于细胞周期各个时期的细胞数量及B淋巴细胞分泌抗体的情况,观察LDG-A作用于肺癌细胞A549的凋亡和细胞骨架情况,探讨LDG-A对特异性免疫细胞的增殖效应活性及对肿瘤细胞凋亡的影响。
结果与分析
1、LDG-A对T淋巴细胞的影响
实验设置空白对照组、LDG-A实验组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)阳性对照组。
结果可知,当LDG-A的质量浓度为0.25~20 μg/mL时,均能够显着促进T淋巴细胞的增殖,与对照组相比具有极显着性差异(P<0.01),T淋巴细胞的促增殖效应与LDG-A的质量浓度呈现出一定的剂量依赖关系,当LDG-A质量浓度为15 μg/mL时T淋巴细胞的状态和增殖效果最好。
与空白对照组相比,当LDG-A的质量浓度为6.25~25 μg/mL时,T淋巴细胞处于G0/G1期的细胞数量百分比与LDG-A质量浓度呈负相关,而处于G2/M期所占细胞数量百分比与LDG-A质量浓度呈正相关。
2、LDG-A对B淋巴细胞的影响
结果可知,当LDG-A的质量浓度为0.25~20 μg/mL时,均能够显着促进B淋巴细胞的增殖,与空白对照组相比具有极显着性差异(P<0.01),且LDG-A的质量浓度与促进B淋巴细胞增殖的效应呈正相关,当LDG-A质量浓度为20 μg/mL时B淋巴细胞的状态和增殖效应最好。
与空白对照组相比,当LDG-A的质量浓度为0.5~10 μg/mL时,B淋巴细胞处于G0/G1期的细胞数量百分比与LDG-A质量浓度呈负相关,而处于S期和G2/M期所占细胞数量百分比与LDG-A质量浓度呈正相关。
LDG-A在质量浓度为0.625~5 μg/mL时,均能刺激B淋巴细胞分泌IgM、IgD和IgE,且均与LDG-A的质量浓度呈正相关, IgM和IgE抗体水平与空白对照组相比均具有极显着差异(P<0.01);其中,LDG-A质量浓度为5 μg/mL时,IgM、IgD和IgE的促分泌效果最好。说明LDG-A在体液免疫方面具有免疫增强作用。
3、LDG-A对肺癌细胞A549的影响
当LDG-A的质量浓度为12.5~50 μg/mL时,LDG-A能够诱导肺癌细胞A549凋亡,并呈现出一定的剂量依赖关系,肺癌细胞A549凋亡的程度与LDG-A的质量浓度呈正相关。当LDG-A的质量浓度为50 μg/mL时,其促进肺癌细胞A549凋亡的效果最好。与空白对照组相比,可以观察到在细胞凋亡时F-肌动蛋白丝断裂,蛋白纤维网络结构遭到破坏。说明LDG-A能够诱导肺癌细胞A549凋亡。
讨 论
T、B淋巴细胞在一定质量浓度的LDG-A刺激下,细胞数量与LDG-A的质量浓度呈现出一定的剂量依赖性;细胞周期在G0期的停滞时间和G1期的准备时间减少,而处于S期、G2期和M期的细胞数量百分比增加;并且LDG-A还能刺激B淋巴细胞分泌IgM、IgD和IgE,且分泌量与LDG-A的质量浓度呈正相关。说明LDG-A能够促进T、B淋巴细胞的分裂,对T、B淋巴细胞具有促增殖作用;还能提高B淋巴细胞产生特异性抗体的潜力,促进T淋巴细胞直接作用于靶细胞,使得机体的特异性免疫功能增强,介导机体的特异性免疫反应。
细胞骨架结构改变使得活细胞的结构形态和生理功能发生改变,细胞失去原有的活性,从而导致细胞凋亡。实验中肺癌细胞A549在LDG-A的作用下出现凋亡,细胞骨架发生改变,但在LDG-A作用下,F-肌动蛋白丝发生断裂的情况没有阳性对照组明显,推测LDG-A的抗肿瘤免疫机制是通过激活T、B淋巴细胞等特异性免疫细胞,提高机体免疫力来抑制肿瘤细胞的生长,以达到抗癌的作用。