食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸萘乙二胺法（CFDA意见稿）

 

　　本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。

 

　　本方法适用于肉及肉制品中亚硝酸盐的快速测定。

 

　　2　原理

 

　　样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐实现定性和半定量检测。

 

　　3　试剂和材料

 

　　除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

 

　　3.1　试剂

 

　　3.1.1　对氨基苯磺酸（C6H7NO3S）。

 

　　3.1.2　盐酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl）。

 

　　3.1.3　对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

 

　　3.1.4　盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶解于100 mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

 

　　3.2　参考物质

 

　　制备亚硝酸盐质控样品使用的亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分了质量见表1，纯度≥99%。

 

　　表1   亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分了质量

　　3.3　材料

 

　　亚硝酸盐快速检测试剂盒，适用基质为肉及肉制品，试剂盒需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

 

　　4　仪器和设备

 

　　4.1　移液器：200 ?L和1 mL。

 

　　4.2　涡旋混合器或超声仪。

 

　　4.3　电子天平或手持式天平：感量为0.01 g。

 

　　4.4　离心机：转速≥3000 r/min。

 

　　4.5　微孔滤膜：0.45 μm（水系）。

 

　　5　分析步骤

 

　　5.1　试样制备

 

　　取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。

 

　　--取混匀后的供试样品，作为供试试样。

 

　　--取混匀后的空白样品，作为空白试样。

 

　　5.2　试样的提取与测定

 

　　准确称取试样1 g（精确至0.01 g），置于离心管中，准确加水10 mL，根据样品状态，超声或涡旋振荡提取5 min，静置10 min。准确吸取1 mL上清液（如样品浑浊离心5 min取上清液或经微孔滤膜过滤后取续滤液）于检测管中，向检测管中滴加对氨基苯磺酸溶液200 μL，混匀静置1 min，再加入盐酸萘乙二胺溶液100 μL，混匀静置5 min，与标准色阶卡目视比色。

 

　　5.3　平行试验

 

　　对试样进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。

 

　　5.4　质控试验

 

　　每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验。

 

　　5.4.1　空白试验

 

　　称取空白样品，按照5.2步骤与样品同法操作。

 

　　5.4.2　质控样品试验

 

　　亚硝酸盐质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质按照实际生产工艺生产的，含有一定量亚硝酸盐，并可稳定保存的样品。质控样品中亚硝酸盐含量应包括但不限于《食品安全国家标准食品添加剂使用标准 GB 2760-2014》规定的允许限量值（以亚硝酸钠计）：30 mg/kg、50 mg/kg、70 mg/kg。

 

　　每制备批检测均同时测定一个质控样品，选择量值与待测样品限量值接近的质控样品，按5.2步骤与样品同法测定，用色阶卡和质控样品同时对检测结果进行控制。

 

　　6　结果判定

 

　　观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较，颜色浅于或接近于检出限（1 mg/kg）则为阴性样品；如呈类似紫红色的颜色，目视判读，10以上的比色结果估读成5的倍数（如25，50，70等），10以下的比色结果直接判读（如7，6，5等），相近颜色对应的含量即为样品中亚硝酸盐的含量。色阶卡见图1。

　　6.1　质控试验要求

 

　　空白试验测定结果应为阴性，质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范围内。

 

　　7　结论

 

　　由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。对于不允许添加亚硝酸盐的样品，测定结果大于检出限（1 mg/kg）时，应对结果进行确证；对于允许添加亚硝酸盐的样品，测定结果接近或大于30 mg/kg时，应对结果进行确证。

 

　　8　性能指标

 

　　8.1　检测限：1 mg/kg。

 

　　8.2　灵敏度：灵敏度应≥99%

 

　　8.3　特异性：特异性应≥85%。

 

　　8.4　假阴性率：假阴性率应≤1%。

 

　　8.5　假阳性率：假阳性率应≤15%。

 

　　8.6  相对准确度：在30 mg/kg、50 mg/kg、70 mg/kg三个限量值点的相对准确度均应≥85%。

 

　　注：性能指标计算方法见附录A。

 

　　9　其他

 

　　本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。

 

　　本方法参比标准为 GB 5009.33-2010《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》（包括所有的修改单）。

 

　　待测样品中若存在高含量的亚硫酸氢钠、抗坏血酸或酱油时，会对本法的显色结果产生一定影响，检测时应予以注意。

 

　　色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。