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金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒用于检测食品样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素A,B,C,D,E。此试剂盒只能用于定性检测，不能用于定量检测。
二、原理
金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒采用的是三明治酶免疫分析方法（酶联免疫吸附法）。微孔A-E和H分别包被针对SET A,B,C,D,E的特异性抗体，微孔F和G作为阴性质控孔，包被与SET没有交叉反应的抗体（见下图）。样品中的肠毒素A,B,C,D,E分别与包被相对应的特异性抗体发生反应后，再与另一种特异性酶标抗体发生结合，然后通过TMB底物显色，样品的吸光度值与肠毒素含量呈正相关。
三、检测灵敏度
0.25ppb—1ppb
四、组成
| 组份名称 | 规格 | 保存 |
| 酶标板 | 96T | 2-8℃ |
| 阳性质控品（绿色） | 2ml/瓶 | 2-8℃ |
| 酶标物（粉色） | 12ml/瓶 | 2-8℃ |
| 底物A液 | 6ml/瓶 | 2-8℃ |
| 底物B液 | 6ml/瓶 | 2-8℃ |
| 终止液 | 6ml/瓶 | 2-8℃ |
| 浓缩洗涤液(10×) | 40ml/瓶 | 2-8℃ |
| 说明书 | 1份 | |
| 盖板膜 | 3份 | |
┅┅天平（感量0.01g）
┅┅冷冻离心机
┅┅酶标仪450nm/630nm
┅┅旋涡振荡器
┅┅磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠
┅┅10%次氯酸钠溶液
┅┅去离子水
六、溶液的配制
1．0.02M PBS溶液（pH7.4）
称取NaH2PO4·H2O 0.55g（或NaH2PO4·2H2O 0.62g ）、Na2HPO4·2H2O 2.85g（或Na2HPO4·12H2O 5.73g）、NaCl 8.7g溶于1000 mL去离子水中，充分溶解混匀即可。
2．洗涤工作液
用去离子水将浓缩洗涤液(10×)按1:9体积比进行稀释，即：1份浓缩洗涤液(10×)+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4 ℃环境可保存一个月。
七、检测步骤
测定前须知：
1．使用之前将所有试剂和需用微孔条的温度回升至室温（20～ 25℃）。
2．使用之后立即将所有试剂放回到所需的保存温度。
3．ELISA数据的再现性很大程度取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4．在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板，避免液体溅到盖板膜上，一旦污染盖板膜，需更换。
5．检测过程中吸取不同试剂和溶液时及时更换枪头，用过的枪头及废液要浸泡到10%次氯酸钠溶液中过夜，再进行清洗。
八、样品前处理步骤：
1．牛奶样品
取10-25 mL液体牛奶样品于15 ℃3500 g离心10 min；弃去上层脂肪，取下层脱脂乳100 μL用于检测。
2．肌肉样品
称取2 g绞碎后的样品，加入3 mL 0.02M PBS溶液，于旋涡振荡器振荡1 min至样品分散，再放于摇床剧烈震荡10 min，15 ℃ 3500 g离心10 min，取100 μL上清液用于检测。
九、检测步骤：
1．将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30 min以上，注意每种液体试剂使用前均须轻轻颠倒混匀。
2．取出需要数量的微孔板，（一个样品需要一列八个微孔）将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8 ℃。洗涤工作液在使用前也需回温。
3. 加样：A-G孔分别加入样品100 mL，H孔加100 μL阳性质控品，将盖板膜贴于微孔表面后置室温（20～25℃）避光环境中反应30 min。
4．洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩弃，用洗涤工作液250 mL/孔，充分洗涤4次，每次间隔10 s，在吸水纸上拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破，戳破时切勿碰触微孔壁）。
5．加酶标物：每孔加入酶标物100 mL/孔，轻轻振荡混匀，将盖板膜贴于微孔表面后置室温（20～25 ℃）避光环境中反应30 min。取出，重复洗板步骤5。
6．显色：每孔加入底物A液50 mL/孔，再加底物B液50mL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温（20～25 ℃）避光环境中反应15～20 min。
7. 测定：加入终止液50 mL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm处（建议用双波长450/630 nm检测，请在5 min内读完数据），测定每孔OD值。
十、结果判定
阴阳性质控孔需满足下面的条件：
阴性质控孔：450nm/630nm下读数低于0.3
阳性质控孔：450nm/630nm下读数高于0.5。
如果不能同时满足以上条件，实验需重做。
每一列微孔的的F和G孔是阴性质控孔，两个阴性质控孔OD值的平均值加上0.15为阈值（T）。
即：阈值（T）=(NC1+NC2)/2+0.15
如果样品吸光值高于或等于阈值，则结果为阳性，表示样品中检测出某型金黄色葡萄球菌肠毒素。如果样品吸光值低于阈值，则结果为阴性，表示样品中未检测出金黄色葡萄球菌肠毒素。
十一、阳性结果确认
1．阳性结果需要确认样品分离出的金黄色葡萄球菌的产肠毒素的特征。参照金黄色葡萄球菌肠毒素的表面培养。
2．需要注意的是在加热或物理处理过程中造成细菌死亡，但肠毒素依然存在于样品中。也就是说样品可能对肠毒素显示阳性，但对金黄色葡萄球菌可能显示阴性。
3．注意：样品中具有相似性质的物质，如由金黄色葡萄球菌分泌的蛋白质A、内源过氧化物酶和其他内源性物质都可能对结果产生交叉影响。
十二、注意事项
1．反应温度低于说明书中规定的反应温度或试剂及样品没有回到室温（20～25℃）会导致所有微孔的OD值偏低。
2．在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3．每加一种试剂前需将其摇匀。
4．反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5．不要使用过了有效日期的试剂盒及试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件
避免反复冻融，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7．试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。
8．样本不能含有叠氮钠(NaN3)，因为其会抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。
十三、保存期
该产品有效期为12个月。