细胞凋亡是细胞的基本特征之一,在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一种分子量为35.8KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)高亲和力特异结合。标记荧光物质的Annexin V结合到凋亡细胞后,通过荧光颜色可以区分出凋亡细胞与正常细胞。Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。Caspase-3荧光光度法检测试剂盒就是根据这一特点,设计出荧光物质偶联的短肽(Ac-DEVD)2-R110,其中DEVD是一个四肽化合物,在共价偶联时,R110不能被激发荧光,在连续两个反应步骤后,短肽被完全水解后释放出R110。水解的第一步产生一个单肽中间体Ac-DEVD-R110,此物与吸收和发射波长与R110 (exem= 496/520 nm)相似,但是只有R110激发荧光的10%。水解的第二步释放的自由的R110才能被激发发射荧光。根据释放的R110荧光强度的大小,可以测定caspase-3的活性,从而反映Caspase-3被活化的程度。试剂盒中的Ac-DEVD-CHO, 是caspase-3的抑制剂,作为整个反应的负调控物。试剂盒中的 R110 用来做标准曲线,用来定量caspase-3的活力。CD95/Fas和TNF引发细胞凋亡过程中,一系列caspase级联式地活化,其中caspase-8的活化是其第一步反应。快速检测哺乳动物细胞或者组织裂解液中caspase-8活性,常用的办法将caspase-8序列特异性的多肽偶联至发色基团(Ac-IETD)2-R110,当该底物被caspase-8剪切后,R110即游离出来。可以测定荧光的发射强度,也可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,来考察caspase-8的活化程度。试剂盒中也有Ac-IETD-CHO,R110,Cell lysis buffer,Assay buffer。货号30008-2试剂盒内容物:
- 100ml,Cell Lysis Buffer
- 4*1.25ml Assay Buffer
- 500ul 酶底物(Ac-DEVD)2-R110(1mM)
- 20ul 酶抑制剂Ac-DEVD-CHO(5mM)
- 1ml R110(80uM)
货号 | 产品名称 | 规格 |
30008-2 | Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit | 100 次 |
30008-1 | Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit | 25次 |
30009-1 | Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 1 mL |
30009-2 | Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 10 mL |
30009-3 | Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 100 mL |
30011-2 | Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit | 100次 |
30011-2 | Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit | 100 次 |
30011-1 | Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit | 25次 |
30012-2 | Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 10 mL |
30012-3 | Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 100 mL |
30014-1 | Caspase-9 LEHD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit | 25次 |
30014-2 | Caspase-9 LEHD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit | 100次 |
30015-1 | Caspase-9 LEHD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 1 mL |
30015-2 | Caspase-9 LEHD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 10 mL |
30015-3 | Caspase-9 LEHD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit | 100 mL |