点击图片查看原图
biovet猪副嗜血杆菌抗体检测试剂
检测原理：
猪的血清样品和对照经过稀释后加入到包被了HPS抗原的微孔板中孵育，同时也加入到包被了cell lysate 的微孔板中孵育。阳性样品中对HPS特异反应的抗体会和微孔板中的抗原结合。多次洗板是为了清除未结合的物质，加入酶标记物标记抗体。孵育后，多次洗板清除未结合的酶，最后加入底物发色剂显色。在这步孵育过程中，如果有酶存在，将会有绿色产生，读出其吸光度。通过颜色的鉴定判断样品的结果。阴性对照反应很不明显（很淡的绿色），而阳性对照反应很明显（深绿色）。
材料：
必须的材料但试剂盒内不提供的：
1．纯净水
2．可调单多道移液枪
3．吸头
4．ELISA洗板机
5．试管（用于样品稀释）
6．酶标仪（带405nm波长的）
7．可以用于稀释其他缓冲液的容器
试剂盒提供的
1．包被HPS抗原的96孔微孔板，非包被的微孔板（蓝色）各一块
2．可以直接用的阳性对照 2mL
3．可以直接用的阴性对照 2mL
4．酶标记物 50uL
5．10倍浓缩洗液 2×100mL
6．可以直接用的底物发色剂 30mL
7．可以直接用的终止液 30mL
注：终止液保存在4℃时，可能有晶体产生，这个时候使用不会产生任何效果，请把他放回室温待晶体溶解后使用。
操作步骤：
A． 洗液的准备
用蒸馏水稀释十倍，例如50mL浓缩洗液加450mL蒸馏水，稀释后在4℃可以保存1周。
B． 样品准备
强烈建议样品和对照物做平行
用1倍浓度的洗液（参见步骤A）按1：50稀释猪血清（例如：6uL样品放入294uL1X洗液中）。保证每个吸头都是新的并且样品都充分混匀。
C． 用1倍浓度的洗液（参见步骤A）（详见英文说明书）
D．检测步骤：
回温
1． 建立板的图表
2． A1 A2加入阳性对照
3． B1 B2加入阴性对照
4． C1/C2,D1/D2。。。加入样品
5． 23℃孵育30分钟
6． 300uL1倍浓度的洗液反复洗4次。
7． 加入100uL酶标记物到每个孔中
8． 23℃孵育30分钟
9． 洗板
10． 每孔中加入100uL底物
11． 避光在23℃条件下孵育20分钟
12． 加入100uL终止液
13． 405nm波长下测吸光度（详见说明书）
14． 计算
结果：
每个样品S 包被孔有抗原的为1 没抗原的为2 P为阳性对照
(OD s1 —OD s2)
R=_________________________
(OD p1 —OD p2)
检测有效性
阴性对照R必须小于0.25
阳性对照OD必须大于0.6
结果判断
R小于0.6的为阴性
R大于等于0.9的为阳性
R在0.9和0.6之间的为疑似