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三聚氰胺检测试剂盒使用说明书
产品名称通用名称：三聚氰胺检测试剂盒英文名称：ELISA Kit to Detect Melamine产品编号：TH056-1概要三聚氰胺是一种化工原料，主要用于涂料、塑料、肥料和清洁产品等。不法商贩为了提高蛋白质含量，常将三聚氰胺添加在牛奶及奶制品中。三聚氰胺在食品中危害极大，可导致婴儿肾结石和肾功能衰竭。三聚氰胺酶联免疫试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。包装规格96T/盒预期用途可定性、定量检测牛奶、奶粉及饲料等样本中的三聚氰胺的残留量。测定原理样品中游离的三聚氰胺与酶标板上固定的三聚氰胺抗原特异性竞争抗体，酶标二抗可与抗体反应，然后洗掉游离的酶标二抗和抗体，再通过被固定的酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺的含量。根据竞争性原理，如果样品中的游离三聚氰胺量少，则酶标二抗结合多，显色深，反之，则显色浅。产品组成1、三聚氰胺酶标板：96孔2、三聚氰胺标准品：6瓶（1ml/瓶）,含量分别是：0ppb，1 ppb，3ppb，9ppb，27ppb，81ppb3、三聚氰胺高浓度标准品（添加回收实验）：10ppm4、三聚氰胺抗体工作液：1瓶（7ml）， 直接使用5、三聚氰胺酶标二抗：1瓶（13ml），直接使用6、三聚氰胺底物液A：1瓶（7ml），过氧化脲7、三聚氰胺底物液B：1瓶（7ml），四甲基联苯胺8、三聚氰胺终止液：1瓶（7ml），2M硫酸9、10×浓缩洗涤液：1瓶（50ml），用于洗板10、说明书一份11、质检报告一份12、盖板膜一张使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪┅┅均质器┅┅振荡器┅┅离心机┅┅天平，精度0.01g┅┅微量移液器：单道20μl ~200μl、100μl~1000μl多道50μl~300μl试剂：┅┅去离子水溶液配制1×洗涤工作液：取50ml 10×浓缩洗涤液，加去离子水450ml，混匀。可在2-8℃保存三个月。 待测样品处理方法1、液态奶（稀释系数20）1) 取液态奶50μl于洁净离心管中，加入950μl去离子水，充分混匀，2) 室温4000g离心5min，去除上层脂肪层（脱脂或低脂奶此步可省）；3) 取50μl用于检测。2、奶粉、饲料（稀释系数200）1) 称取1±0.05g样品（饲料需粉碎）于50ml离心管中，加入10ml去离子水充分混匀；2) 取50μl加入950μl去离子水，再次充分混匀；3) 室温4000g离心5min；4) 取50μl上清用于检测。注意事项 1) 使用前将试剂盒回升至室温（20-25℃）。2) 严格按说明书操作，不得改变加样顺序及温育时间，每加一种试剂前需将其摇匀。3) 尽量缩短加样时间，加入相同试剂或样品时应使用多道微量移液器。4) 洗板应保持一致性，不可更改冲洗次数。洗涤后，避免微孔干燥，否则可能会造成标准曲线不成线性或重复性不好的现象。5) 若底物液B有任何颜色表明其变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂盒可能变质。6) 若酶标板底部被污染，则在读数之前用软纸轻轻擦试微孔板底部，防止因污染而影响读数结果。7) 在所有恒温孵育过程中，要避免光线照射，应用盖板膜盖住微孔板。8) 没有用完的微孔板应存放回有干燥剂的密封袋内，2-8℃密封干燥保存，试剂盒避免冷冻。9) 不要使用过期的试剂盒及各组份，不要同时使用不同批号试剂盒中的试剂。酶免分析步骤1、将标准品和样品对应的微孔编号，每个标准品和样品做双孔平行，并记录标准品和样品的位置。2、在标准品孔中加入50µl各标准品溶液，在各样品孔中加入50µl样品溶液。3、在所有孔中加入50µl的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光反应30分钟。4、小心揭开盖板膜，甩干孔中液体，用稀释好的洗涤液（250μl/孔）充分洗涤微孔板3次，在吸水纸上拍干（拍干后未清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。5、在所有孔中加入100µl的酶标二抗，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光反应30分钟。取出酶标板，按步骤4洗板5次。6、洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl底物液A，再加 50µl底物液B，轻微晃动反应板使之彻底混匀，25℃环境避光显色15分钟 (在颜色浅的情况下可适当延长反应时间，但总显色时间不要超过30分钟)。7、每孔中加入50µl终止液，轻轻晃动使之彻底混匀，在450nm（建议使用双波长450/630nm）下检测吸光度，结果在5分钟内读取。结果计算1、所获得的标准溶液和样本的每个浓度吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%,即百分吸光度值。2、以三聚氰胺浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为三聚氰胺浓度的对数值,求得反对数即为测定液中三聚氰胺浓度C（ng/ml）。样本经过稀释时应乘以相应稀释系数。样品检测下限本试剂盒的最低检测灵敏度是1ppb(1ng/ml、1μg/l或1μg/kg)。交叉反应(特异性)三聚氰胺……………………………………100% 样品最低检测限液态奶………………………………………20ppb奶粉、饲料…………………………………200ppb准确度（回收率）液态奶………………………………………95±15％奶粉、饲料…………………………………95±15％精密度试剂盒板内变异系数小于8%，板间变异系数小于15%。贮藏条件及保存期产品保存于2-8℃，自生产日期起12个月内有效。