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| 一、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿、组织、饲料中的沙丁胺醇，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的沙丁胺醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗沙丁胺醇抗体，再加入酶标二抗，用TMB底物显色，样品中的沙丁胺醇含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出沙丁胺醇含量。 二 、试剂盒技术指标 试剂盒灵敏度：0.1 ppb 检测下限 组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝） 1.0 ppb 猪尿 0.1 ppb 交叉反应率 沙丁胺醇（Salbutamal） 100% 克伦特罗（Clenbuterol ） ﹤10% 莱克多巴胺（Ractopamine） < 0.1% 肾上腺素（Adrenalin） < 0.1% 去甲肾上腺素（Noradrenalin） < 0.1% 异丙肾上腺素（Isoporterenol） < 0.1% 样本回收率 组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝） 90±20% 猪尿 100±20% 三、试 剂 盒 组 成 1. 酶标板： 96T/8孔 2. 标准品液:： 0 ppb、0.1 ppb、0.4 ppb、1.6 ppb、6.4 ppb、25.6 ppb（1mL/瓶） 3. 抗体工作液 1瓶（7 mL） 4. 酶标记物： 1瓶（12 mL） 5. 底物缓冲液： 1瓶（7 mL） 6. 底物液： 1瓶（7 mL） 7. 终止液： 1瓶（7 mL） 8. 20倍浓缩洗涤液： 1瓶（50 mL） 加蒸馏水稀释到1000 mL 9. 样品稀释液： 1瓶（12 mL） 用于稀释尿样 四. 样品处理 尿样：（稀释倍数为2） 先加入25μL样品稀释液，再加入25μL尿样到微孔板中，混合均匀。浑浊尿样以4000 rpm离心5 min，取上清（清亮部分）。 猪肝、猪肉等组织 前处理配制的溶液 配液1：0.5M盐酸溶液 量取41.5ml浓盐酸加入去离子水定容到1000 ml 配液2：8%氯化钠溶液 称取80.0g氯化钠，加1000ml去离子水溶解混匀 配液3：提取液 配液1：配液2=1：4比例混合 配液4：1M氢氧化钠溶液 称取20.0g氢氧化钠 1． 称2±0.05 g组织放入15ml的离心管中，加入6 mL 提取液，充分摇匀后放置5-10 min； 2． 室温4000 r/min 以上离心5 min； 3． 移取1ml 上清液到2ml离心管中，加入45μL配液4溶液，混匀，调整PH值7-8。 4. 取50μL下层进行分析。 样本稀释倍数：4 饲料（稀释倍数10） 1．用研钵研碎饲料，称1 g研碎的饲料样品加入10 mL 0.01 M的盐酸，充分混合5 min。2．检查pH值是否在6.5-8之间，否则用氢氧化钠或盐酸调节。 3．3500 rpm离心5 min，转移出上清液（如上清液仍然浑浊可提高转速或用滤纸过滤）。4．吸取50μL进行检测。 五、操作步骤 1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。 3． 加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL /孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37 ℃反应30 min。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5．加入酶标记物100 µL /孔，用封板膜盖板，37 ℃反应20 min。 6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。 7． 显色：每孔加入底物缓冲液50 µL，再加底物液50 µL，轻轻振荡混匀，37 ℃环境避光显色10 min。 8． 测定：每孔加入终止液50 µL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。 六、结果判定 以标准品百分吸光率为纵坐标，以沙丁胺醇标准品浓度（ng/mL）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中沙丁醇实际浓度。 七、注意事项 1. 终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。 2. 不要使用已过有效日期的孔雀石绿检测试剂盒；不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。 3. 0标准液的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。 4. 显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。 八、储藏条件和保质期 储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。 保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒 | ||